Что такое иммуноферментный анализ
Иммуноферментный анализ (ИФА) - лабораторное исследование основанное на высокой избирательности и специфичности иммунологических реакций “антиген-антитело”.
Различают несколько десятков модификаций ИФА. Наибольшее распространение получил твердофазный гетерогенный иммунный анализ - ELISA (enzyme linked immunosorbent assay). ИФА применяют для двух целей - для определения наличия антигенов возбудителей различных инфекций, но значительно чаще метод ИФА применяется для определения наличия антител классов ( IgA IgM IgG) к антигенам различных возбудителей болезней. С помощью ИФА можно определить антитела к любой половой инфекции (при условии, конечно, что организм их выработал)
Как проводится исследование методом ИФА
Механизм реакции:
В основе иммуноферментного анализа лежит иммунная реакция антигена с антителом, а присоединение к антителам ферментной метки позволяет учитывать результат реакции антиген-антитело по появлению ферментативной активности или по изменению ее уровня. В упрощенном виде механизм реакции можно представить следующим образом:
|
|
Первая реакция происходит между определяемым Ig (Ab) и очищенным антигеном возбудителя (Ag), фиксированным к поверхности лунок иммунологического планшета |
|
|
Для выявления образовавшихся иммунных комплексов проводят вторую иммунологическую реакцию, в которой в качестве антигена выступает связавшийся специфический Ig, а в качестве антител к нему — коньюгат, представляющий собой Ig (Ab) к соответствующему Ig человека, меченный ферментом - пероксидазой (K)
|
|
|
Далее происходит ферментативная реакция, катализируемая ферментной частью молекулы коньюгата. Субстратом данной реакции служит бесцветное вещество — хромоген, который в ходе реакции образует окрашенное вещество. Интенсивность окраски в лунке определенным образом зависит от количества содержащихся в пробе иммуноглобулинов. |
Подсчет результатов:
|
положительный результат окрашивание |
|
После остановки реакции проводят фотометрирование лунок с помощью специальных приборов. для учета результатов используют специальные приборы. При сравнении со значений оптической плотности контрольных проб проводят математическую обработку результатов анализа. Чем выше оптическая плотность в данной ячейке, тем большее количество специфических антител содержится в пробе |
Проведение иммуноферментного анализа.
Для серодиагностики используются 96-и луночные полистирольные планшеты, на стенках ячеек которых заранее адсорбируется антиген. Исследуемая сыворотка вносится в ячейку планшета. При этом гомологичные антигену антитела прикрепляются к нему. Не прикрепившиеся антитела удаляются промыванием. Далее в ячейки вносят антитела против иммуноглобулинов (антител) человека, меченые ферментом. Если в исследуемой сыворотке присутствовали определяемые антитела, то они на этом этапе выступят в роли антигенов, с которыми прореагируют меченые антитела. Добавление после промывки хромогенного вещества (красителя) позволит учесть реакцию по развивающемуся окрашиванию в ячейках. Интенсивность окраски при этом пропорциональна количеству фермента, а следовательно количеству антител. При измерении оптическую плотности (ОП) жидкости в ячейке и сравнивании ее с контрольным образцом подсчитывается концентрация антител в единицах объема. Наиболее часто применяется подсчет результатов в единицах оптической плотности. Надо учитывать, что для каждой тест-системы есть свои показатели учета результатов и показатели нормы и патологии, на которые надо ориентироваться при интерпретации результатов.
Какие инфекции можно выявить методом ИФА
В основном в современной венерологии применяется для диагностики сифилиса (в комплексе с другими реакциями), ВИЧ-инфекции, гепатитов. Имеет ограниченное значение для диагностики хламидийной инфекции, цитомегаловирусной инфекции и других инфекций. Метод ИФА используется также для определения антител при различных инфекционных заболеваниях, уровня гормонов, аутоантител и различных маркеров онкологических заболеваний.
|
ВАЖНОЕ ЗАМЕЧАНИЕ |
Определение наличия и уровня антител в крови не рекомендуется применять для первичной диагностики инфекций, передающихся половым путем. Единственное исключение - по результатам ИФА возможно распознавание сифилиса в комплексе с реакцией микропреципитации. Но необходимо отметить, что наличие антител в сыворотке крови может свидетельствовать только о контакте организма с возбудителем в настоящее время или в прошлом. |